蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)試盒的實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)

（紫外比色法）

一、試劑組成和配制（50 管/24 樣，貨號(hào) A087-1-1）：

試劑一：勻漿介質(zhì)，無色透明液體，50mL×1 瓶；4℃保存；

試劑二：淺磚紅色液體，2.5mL×1 瓶；4℃避光保存；

試劑三：黃色液體，10mL×1 瓶；4℃避光保存；

試劑四：無色液體，10mL×1 瓶；4℃保存；

試劑五：無色液體，30mL×1 瓶；4℃保存；

試劑六：無色液體，70mL×1 瓶；4℃保存；

自備試劑：無水乙醇（分析純）；乙酸乙酯（分析純）；

洗滌液的配制：將無水乙醇和乙酸乙酯按照體積比 1︰1

的比例混合配置成溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；

二、試劑組成和配制（100 管/48 樣，貨號(hào) A087-1-2）：

試劑一：勻漿介質(zhì),無色透明液體，100mL×1 瓶；4℃保存；

試劑二：淺磚紅色液體，5mL×1 瓶；4℃避光保存；

試劑三：黃色液體，20mL×1 瓶；4℃避光保存；

試劑四：無色液體，20mL×1 瓶；4℃保存；

試劑五：無色液體，60mL×1 瓶；4℃保存；

試劑六：無色液體，70mL×2 瓶；4℃保存；

自備試劑：無水乙醇（分析純）；乙酸乙酯（分析純）；

洗滌液的配制：將無水乙醇和乙酸乙酯按照體積比 1︰1

的比例配置成混合溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；

三、操作步驟：

1、血清(漿)前處理：取血清或血漿原液進(jìn)行測(cè)定(同時(shí)用

雙縮脲試劑盒（本所有售,貨號(hào) A045-1）測(cè)定血清（漿）

中總蛋白濃度)；

2、組織樣本前處理：準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積

(mL)=1︰9 的比例加入 9 倍的試劑一(如準(zhǔn)確稱取組織

重量 0.1g 加入 0.9mL 的試劑一)，冰水浴條件下機(jī)械勻

漿，2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10min，取上清即 10%勻漿 450µL，

加入 50µL 試劑二，混勻，室溫放置 10min 后，

11000r/min

離心 10min，取上清按操作表測(cè)定(同時(shí)取部分上清用考

馬斯亮藍(lán)試劑盒（本所有售,貨號(hào) A045-2）測(cè)定勻漿的

總蛋白濃度)；

四、測(cè)定意義：

一種檢測(cè)蛋白質(zhì)羰基含量的試劑盒?？珊啽?、靈敏的

檢測(cè)各種組織器官、血清、培養(yǎng)細(xì)胞（做法同組織樣本）

和細(xì)胞器等蛋白質(zhì)羰基含量。其使用不需要昂貴的設(shè)備，

樣品處理簡單，可廣泛應(yīng)用于各種疾病如衰老、動(dòng)脈硬化

癥，糖尿病和帕金森綜合癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的早期

診斷，抗氧化保健食品、抗氧化藥物和化妝品等的評(píng)價(jià)，

還可以用于評(píng)價(jià)由于一些環(huán)境有害因子如輻射、化學(xué)毒物

等對(duì)機(jī)體造成的氧化損傷。

五、實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)：

1、在用無水乙醇乙酸乙酯混合應(yīng)用液對(duì)反應(yīng)沉淀進(jìn)行洗

滌時(shí)，漩渦混勻一定要?jiǎng)×页浞?，混勻時(shí)間不得少于一

分鐘，反應(yīng)沉淀物必須洗滌至白色，如果沉淀物還有黃

色殘留，適當(dāng)增加無水乙醇乙酸乙酯混合應(yīng)用液的洗滌

次數(shù)，以保證洗滌充分，否則會(huì)使得測(cè)定結(jié)果偏高；

2、在進(jìn)行蛋白質(zhì)羰基測(cè)定時(shí)，離心的轉(zhuǎn)速不可以隨意降

低，否則會(huì)使得測(cè)定結(jié)果偏高；

3、在進(jìn)行蛋白質(zhì)羰基測(cè)定時(shí)，建議使用圓底的離心管進(jìn)

行實(shí)驗(yàn)，這樣在進(jìn)行無水乙醇乙酸乙酯混合應(yīng)用液洗滌

時(shí)，可以保證沉淀被充分洗滌。不建議使用尖底的離心

管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

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