RNA溶解-長(zhǎng)效保存液使用范圍

描述：RNA極易降解。純化的RNA溶解于無(wú)RNase的TE或水中，即便是儲(chǔ)存于?20 oC也難免降解。為解決這一問(wèn)題，可以將RNA沉淀或RNA溶液直接溶解于RNA溶解-長(zhǎng)效保存液中，允許4 oC 過(guò)夜或?20 oC保存至少2年，保護(hù)樣品RNA免于降解。RNA溶解-長(zhǎng)效保存液是RNA樣品運(yùn)輸和中長(zhǎng)期保存的最-佳選擇。需要時(shí)可用常規(guī)乙醇法沉淀回收RNA，或直接吸取儲(chǔ)存于RNA溶解保護(hù)液中的高濃度RNA(4 mg/ml)進(jìn)行RNA電泳、Northern Blot。

儲(chǔ)存：4oC保存 12個(gè)月有效

用RNA溶解-長(zhǎng)效保存液溶解RNA沉淀：
1   a) 對(duì)固體RNA沉淀而言，每0.4-4 mg RNA沉淀加入1 ml RNA溶解-長(zhǎng)效保存液，室溫振蕩15-30分鐘溶解沉淀。干燥的RNA沉淀難以溶解，可50 oC加熱15分鐘或4oC溶解過(guò)夜。最好先用小體積無(wú)RNase的TE或水溶解RNA沉淀，然后按液態(tài)RNA操作。
b) 對(duì)液態(tài)RNA溶液，每0.4-4 mg RNA溶液加入1 ml RNA溶解-長(zhǎng)效保存液，混勻。注意混合液中RNA溶解-長(zhǎng)效保存液的體積百分比不低于80%。
2. 測(cè)定OD值。注意加入相應(yīng)量的RNA溶解-長(zhǎng)效保存液做空白。
3. 將溶解的RNA樣品儲(chǔ)存于?20 oC。

從RNA溶解-長(zhǎng)效保存液中沉淀RNA：
1. 估計(jì)RNA溶液終體積。加入4倍體積的純乙醇，混勻。如果溶液中RNA含量低于0.25 mg/ml，或者溶液體積過(guò)小操作不便，可先加入1/20體積的5 N NaCl混勻，然后再加入4倍體積乙醇。
2. 室溫放置5分鐘。
3. 12,000 rpm 5 min。棄上清。風(fēng)干，溶解。
4. 重新沉淀的RNA溶解后可用于RT-PCR反應(yīng)。也可用于任何其他實(shí)驗(yàn)。
直接使用RNA溶解-長(zhǎng)效保存液中的RNA：
直接吸取RNA溶解-長(zhǎng)效保存液中的RNA，進(jìn)行普通或甲醛變性電泳和Northern Blot。進(jìn)行甲醛變性電泳時(shí)，最后上樣樣品中的RNA溶解-長(zhǎng)效保存液的濃度可高達(dá)50%。

注意：
1. 如果RNA用于逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR，不推薦直接使用RNA溶解-長(zhǎng)效保存液中的RNA，應(yīng)該用乙醇沉淀RNA。
2. 在RNA溶解-長(zhǎng)效保存液中的RNA的終濃度不應(yīng)該超過(guò)4mg/ml。