β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)測(cè)定試劑盒的組成

（比色法 50 管/24 樣）

一、測(cè)定原理：

β-N- 乙 酰 氨 基 葡 萄 糖 苷 酶

（β-N-Acetylglucosaminidase，NAG）廣泛存在于各種組

織器官、體液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板中，是溶酶體

中的一種酸性水解酶。底物在 NAG 作用下水解，釋放

出游離的對(duì)硝基酚。加入堿性溶液停止反應(yīng)，并使對(duì)硝

基酚顯色。在 400nm 處測(cè)吸光度，可計(jì)算酶活力單位。

二、試劑組成及配制： (試劑 2-8℃保存，有效期 6 個(gè)月)

試劑一：溶液 40mL×1 瓶。

試劑二：底物，粉劑×1 支。

試劑三：終止劑 60mL×2 瓶。

試劑四：液體 6mL×1 瓶。(天冷會(huì)有結(jié)晶析出，測(cè)試前

置于 37℃水浴直至透亮)

試劑五：3mmol/L 對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液 2mL×1 瓶。

0.6mmol/L 對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：將 3mmol/L 對(duì)

硝基酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液用蒸餾水作 5 倍稀釋?zhuān)?/span>

3mmol/L 對(duì)硝基酚∶蒸餾水=1∶4 稀釋。

底物緩沖液的配制：底物溶解度小，配制底物溶液時(shí)，

應(yīng)先用適量試劑一將試劑二粉劑 1 支調(diào)成糊

狀，再邊攪拌邊逐漸加試劑一到 30mL，混勻

至溶解（不可加熱）。配好后的底物緩沖

液為過(guò)飽和溶液，如有結(jié)晶，可靜置或離心后

取上清進(jìn)行檢測(cè)。用不完的底物緩沖液 4℃可

保存兩個(gè)月以上。

三、操作步驟：

五、注意點(diǎn)：

1、用分光光度計(jì)測(cè)定時(shí)吸光度至 0.60 或酶活力至 60 單位

呈線性，超出此范圍應(yīng)將標(biāo)本用生理鹽水稀釋后重測(cè)，

結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

2、尿酶濃度隨尿流率而變動(dòng)，因此尿酶測(cè)定要求留取 24

小時(shí)尿；但因留 24 小時(shí)尿不方便，也不準(zhǔn)確，故用“酶

單位/肌酐"比值計(jì)算酶排出率，效果較好。

附錄Ⅰ: 大鼠腎皮質(zhì)中 NAG 的測(cè)定

1、 樣本前處理：

準(zhǔn)確稱(chēng)取樣本的重量，按照重量(g):體積(mL)=1 : 9

的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻

漿，制成 10%勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清

再用生理鹽水稀釋成 1%的勻漿液待測(cè)。（該勻漿濃度僅

為參考用，客戶(hù)測(cè)定時(shí)可以根據(jù)這一濃度自行摸索樣本的

實(shí)際所需濃度）

2、 操作步驟：

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)測(cè)定試劑盒的組成