細(xì)胞凍存液的使用說明！

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。

原理：

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。

使用方法：

1、細(xì)胞凍存

（1）常規(guī)收集貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞至15ml無菌離心管；

（2）100-200g，離心5-10分鐘，棄上清；

（3）計(jì)算出細(xì)胞總數(shù)和所需細(xì)胞凍存液的量。細(xì)胞的凍存密度一般為5×105~1×107cells/ml；

（4）加入適量細(xì)胞凍存液，用移液槍輕輕吹打以重懸細(xì)胞，分裝于1.5ml或2ml細(xì)胞凍存管中，并做好標(biāo)識(shí)；

（5）將細(xì)胞凍存管放置于可逐步降低溫度的裝置如程序性凍存盒內(nèi)并放置在-80oC冰箱內(nèi)，確保冷卻速度約為1oC/min。通常冷卻速度不宜快于0.5oC/min；

（6）短期保存可放置在-80oC冰箱內(nèi)，若保存應(yīng)轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

2、細(xì)胞復(fù)蘇

（1）從液氮中取出凍存管，迅速置于37oC水浴鍋內(nèi)，輕輕晃動(dòng)(1分鐘內(nèi))，直至*融化；

（2）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml無菌離心管中，加入約5-10ml預(yù)熱的*培養(yǎng)基，輕輕混勻；對于一些復(fù)蘇效率很高的細(xì)胞也可直接將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管進(jìn)行下一步驟的離心；

（3）100-200g，離心5-10分鐘；

（4）確保細(xì)胞沉積于管底后，小心棄掉上清；

（5）加入適量預(yù)熱的*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿中，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1、本產(chǎn)品需注意無菌操作，避免溶液被微生物污染；

2、請確保凍存前細(xì)胞生長情況良好，例如處于對數(shù)生的細(xì)胞，并且凍存時(shí)存活率大于90%；

3、建議細(xì)胞凍存在液氮中，可以長時(shí)間進(jìn)行保存。如果置于-80oC保存，保存時(shí)間大約為1年；

4、凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。

5、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作